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爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话

時間:2019-10-14 01:42:12    點擊數:17417

壹、試劑盒內含物

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.說明書亞洲 1 型口疫陽性對照血清( 己稀釋濃度為 1:8)

.96 ELISA 亞洲 1 型口蹄疫陰對照血清

.液體稀釋槽3% 氧水

.U 96孔抗原抗體反應板25×PBST洗滌液(稀爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话量取)

.封板膜豚鼠抗血清稀釋液

.滅活亞洲型口蹄疾病毒抗 (決包裹 )終止液

.亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被緩沖液(碳酸鹽)膠囊

.亞洲口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物 (檸檬酸 -磷酸鹽)緩沖片劑

.兔抗豚鼠血清IgG-辣根過氧化物酶結合物OPD片劑

二、器材準備 ( 需用戶自備 )

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1.移液器:5-50µl移液器、0.210µl移液器、50200µl移液器、50300µl 12道移液器各壹把。

2.移液槍 (若幹)

3.抗體反應板:微量爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话板(U型、V型均可)5,本試劑盒配備兩塊,用於被檢血清的稀釋和抗抗體反應。註:抗原抗體反應板可重復使用,實驗後,用水沖洗幹凈,然後用無離子水沸水浴30,晾幹,待用。

4.純水 , 無離子水或蒸餾水。

三、試劑準備(需用戶完成)

1.包被緩沖液(PH9.6)   將本試劑配備的碳酸鹽緩沖液膠囊1粒小心打開,將膠囊內粉末倒入100ml無離子水中溶解即可。4存放,1月內有效。

2. 洗滌液(PBST)     將本試劑盒配備的 25 倍濃縮 PBST (可能有結晶形成,用時微熱溶化)用無離子水或蒸水做1:25稀釋。(如果PH降低,務必用NaOH調至7.4)

3.底物溶液    1檸檬酸鹽片劑(本試劑盒配備)溶於100mL無離子水中,溶化後,50mL溶液, 再加1片鄰苯二(OPD)片劑,充分溶解,分裝5mL/ 瓶或 10Ml ), 避光之-2O℃保存。 用前光溶化 ,時每1mL上述溶液加 10µL本試劑配備的 3% 雙氧(H202) 務必加雙氧水!

四、操作步驟

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1.用包被緩沖液稀釋亞洲 1 口蹄疫病毒兔抗血清至工作濃度(1:1000), ELISA 爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话振蕩 , 封板或室溫過夜。

2. 抗體(陰陽性對照血清及待檢血清)反應 

根據不同的需要,選擇圖1-2中的壹種布局在抗原抗體反應板上操作

    圖2 96 孔酶標板檢測 20 份樣品布局圖

S11:32

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

+1:32

-1:4

1:64

1:64

1:8

1:128

1:128

1:256

1:256

S111:32

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:512

1:64

1:1024

1:128

1:2048

1:256

1:4096

以圖1 為例 , U 型血凝板上按 50 µl/孔量用 PBST 將待檢 血清從1:4開始做2倍連續稀釋至 1:512。同時,按圖示稀釋陰陽對照血清 , 然後每加入 50 µl PBST 稀釋到使用濃爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话蹄疫病毒抗原 (1:4,1份病毒抗、加3PBST), 病毒抗對照孔加100µl。振蕩混勻,封板,4℃過夜。加入病毒抗原後血清的稀釋度變為從1:8開始的2倍稀釋。

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3.用洗滌液 (1×PBST) ELISA5 ,在洗水紙上甩幹,再將抗抗體混合物從抗抗體反應板上按次序轉移至ELISA板上的相對應孔,每孔50µl封板,37℃溫育1小時。

4.同上洗5, 甩幹。用豚鼠抗血清稀釋液稀釋亞洲1型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作濃度 (1:1000), 孔加50µl,封板,37℃溫育1小時。

5.同上洗 5 , 甩幹。用 l×PBST 稀釋兔抗豚鼠酶結合物至工作濃度 (1:500), 孔加 50 µl封板 ,37 ℃溫育 1 小時。

6. 同上洗板5,孔加50µl底物溶液 (務必加雙氧水),37℃溫育15分鐘。每孔再加50µl終止液終止反應,立即在492nm波長下讀取光吸收值(OD492nm)

五 結果判定

1. 試驗認可標準

每塊板設 4 孔病毒抗原對照,病毒抗原對照不加任何血清,直接用PBST稀釋至使用濃度,與血清/病毒抗原復合物同步加入ELISA板孔,50µl/,病毒抗原對照OD492nm 值應在1.5±0.5範圍內。 陽性對照抗體效價應在1:1024±1滴度以內,陰性對照血清抗體效價應<1:8

2.病毒抗原對照平均OD492nm 50%計算(臨界值)

抗原對照是4,棄去最高和最低OD492nm,計算剩余2孔的平均OD492nm,再除以爱情呼叫转移1 电影-生黑童村上里沙-爱情感人的话值,表示阻斷50%反應的對照OD492nm值。

3.結果判定

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以病毒抗原對照平均OD492nm 值的50%為臨界值,被檢血清稀釋孔OD492nm值大於臨界值的孔為陰性孔,小於或等於臨界值的孔為陽性孔,陽性孔的OD492nm值等於臨界值時所對應的稀釋度為該份血清的抗體滴度。例如病毒抗原對照平均OD492nm值為1.2,則其50%0.60。若某壹待檢血清在1:128OD492nm值為0.6,則該份待檢血清的抗體滴度為 1:128 。若臨界值處於兩個滴度之間 ,如處於1641128之間,則抗體滴度取中間值為1:9O。定性檢測中 , 兩個重復孔只要有壹孔為陽性孔 , 則抗體滴度判定為 1:128, 兩孔均為陽性孔 , 則判定 為抗體滴度>1:128

ELISA抗體效價≥1:128,判定為亞洲 1 型口蹄疫抗體陽性。

ELISA抗體效價與保護力的關系:牛、羊:抗體效價≥1:128,99% 保護;效價≤1:16, 不保護;效價在1:22-90之間,50%保護。